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Western Blot原理介绍

    Western Blot(WB),即蛋白免疫印迹法,是定性、定量检测蛋白表达的一种经典、有效的技术方法。western blot是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。Western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于western blot具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现已成为蛋白分析的一种常规技术。Western blot常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析。 
    信诺金达提供标准western blot技术服务(您需自备一抗)。并对band进行灰度分析,得出蛋白表达相对定量结果。
Western Blot技术路线
Western Blot服务优势
    1. 高分辨率的电泳技术:聚丙烯酰胺凝胶(polyacrylamide gel,PAGE)把分子筛作用和电荷效应结合在同一方法中,达到更高的灵敏度;
    2. 特异敏感的抗原-抗体反应:抗原抗体的结合实质上是抗原表位与抗体超变区中抗原结合点之间的结合。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系,所以抗原与抗体的结合具有高度的特异性。 ;
    3. 1-5ng中等大小的靶蛋白:可检测到低至1~5ng(最低可到10~100pg)中等大小的靶蛋白。
Western Blot服务要求
    需新鲜或正确保存的蛋白样品或者蛋白粗提液,阳性对照样品(如果有), 检测目的蛋白的一抗(或由信诺金达代购)。组织样品不少于50mg;细胞不少于5×10的6次方个;总蛋白浓度不低于 2μg/μl(至少50μl)。
Western Blot步骤
    1. 蛋白提取和定量(如果提供蛋白样品,则直接电泳预实验检测抗体特异性);
    2. SDS-PAGE 10-15% 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳;
    3. 转膜(PVDF膜);
    4. 封闭 (5%脱脂奶粉);
    5. 一抗孵育(其中内参基因为Tubulin或HistoneH3.1);
    6. 二抗孵育(如果由于材料降解或一抗造成实验无法继续,则收相关预实验费用);
    7. 显色(ECL);
    8. 曝光、洗片、灰度分析;
Western Blot实验报告内容
    

蛋白浓度,胶片,膜,以及灰度分析(如果需要)及实验报告

     ; ; 

服务编号 服务项目 内容说明 价格 周期
SGSPN01 蛋白抽提 总蛋白 ¥80/样品 1周
SGSPN02 核浆蛋白分开 ¥200/样品
SGSPN03 蛋白定量 提供蛋白测定总蛋白浓度 ¥50/样品 1周
SGSPN04 Western Blot预实验 Western Blot 检测一抗体特异性 ¥500/目的蛋白(如做正式实验此项免费) 1周
SGSPN05 Western Blot Western Blot 标准服务(包括蛋白质提取和定量,Tubulin标定,不含一抗) ¥1300/目的蛋白·膜 2-3周#
SGSPN06 SDS-PAGE 客户提供蛋白样品 ¥500/组 1-2周

#:一般状况下,2周即可完成实验。如遇特殊情况,如一抗不好,蛋白浓度低或蛋白特殊像分子量大等,周期会有所延长。

点击 订单下载 发送到info@sinogenesci.com或电话咨询信诺金达技术部。

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